ارائه روشی مبتنی بر pcr برای شناسایی و ردیابی همزمان ralstonia solanacearum و pectobacterium carotovorum مهمترین عوامل پوسیدگی سیب زمینی در استان زنجان

بیماریهای ناشی از ralstonia solanacearum و باکتریهای مختلف متعلق به جنس pectobacterium اعم از پژمردگی و پوسیدگی نرم از مهمترین بیماریهای سیب زمینی محسوب می شوند. در مطالعات قبلی باکتریهای مذکور از مزارع سیب زمینی استان زنجان جداسازی و شناسایی شده بودند اما مطالعه ای برای دستیابی به روشی دقیق و سریع برای ردیابی آنها در خاک، آب و مواد گیاهی از جمله بذور سیب زمینی صورت نگرفته بود. لذا این تحقیق با هدف ارائه روشی مبتنی بر multiplex-pcr برای ردیابی همزمان باکتریهای شایع در منطقه انجام شد. بدین منظور از جدایه های شناخته شده باکتریهای مذکور موجود در کلکسیون دانشگاه زنجان استفاده شد و برای تعیین درجه اختصاصیت روش، سایر باکتریهای خاک و اطراف ریشه سیب زمینی مزارع استان زنجان نیز جداسازی گردید. برای ردیابی r. solanacearum از جفت پرایمر rs-1-f/ rs-1-r و برای باکتری های متعلق به جنس pectobacterium از جفت پرایمر s1f/ s1r طراحی شده در آزمایشگاه گروه گیاهپزشکی دانشگاه زنجان استفاده گردید. کارآیی هر روش برای ردیابی باکتریهای مورد نطر ابتدا جداگانه بررسی شد و سپس یک multiplex-pcr برای ردیابی همزمان باکتریهای مذکور طراحی گردید. حساسیت روش طراحی شده با آلوده سازی غده های سالم سیب زمینی به هریک از باکتریهای مذکور بطور جداگانه و توام و سپس تهیه سری رقت از سوسپانسیون بافت آلوده و استفاده از هر رقت در pcr و کشت از رقتها روی محیط آگار غذایی و شمارش کلونی های ظاهر شده ارزیابی شد. اختصاصیت روش مذکور از سوی دیگر با بکاربردن سایر باکتریهای جداشده از خاک بعنوان نمونه dna در pcr بررسی گردید. بر اساس نتایج باند 718 جفت بازی برای جدایه های r. solanacearum و نیز باندهای 300 و 400 جفت بازی در جدایه های pectobacterium spp. مشاهده شدند. حساسیت روش طراحی شده 40 سلول r.solanacearum و 30 سلول pectobacterium spp. در هر میلی لیتر تعیین شد. از ژنوم سایر باکتریهای خاک با این روش هیچگونه باندی تکثیر نشد